一篇被引用千次的論文，了解AAV血清型1-9
對于不少“科研”小白而言，捋清不同血清型的趨向性和表達(dá)量可以說是非常之有必要，今天小編就通過一篇發(fā)表于Molecular Therapy,影響因子8.986，被引用1000多次的論文，帶大家梳理一下AAV的血清型。論文題目“Analysis of AAV Serotypes 1–9 Mediated Gene Expression and Tropism in Mice After Systemic Injection”想深入學(xué)習(xí)的同學(xué)，可以自己解讀一遍，后面待機(jī)閱讀原文即可跳轉(zhuǎn)文章。
首先，解讀這篇文章之前，先給沒有基礎(chǔ)的同學(xué)介紹一下AAV。
AAV屬于微病毒科，是一種長度為26 nm、長度為4.7 kb的線形 DNA病毒。AAV通常與腺病毒同時存在，是在腺病毒制劑中首次發(fā)現(xiàn)的一種污染物質(zhì)。
AAV單股 DNA含有 ITR, Cap, Rep 3個組分.ITR為發(fā)卡型結(jié)構(gòu)，為 AAV拷貝與封裝所需要的惟一順式元件；Cap為病毒的核漿蛋白編碼，使得病毒具備了侵染的能力；而 Rep，則是負(fù)責(zé)病毒基因的復(fù)制與整合。
基于野生型AAV構(gòu)建的重組腺相關(guān)病毒（rAAv）,理論上可攜帶小于5kb分人基因（通常小于2.8kb）。
AAV病毒是一種新型的病毒，其病毒具有多種類型，而不同類型的病毒對不同組織/器官具有不同的轉(zhuǎn)染效率（組織嗜性），其表達(dá)量及持續(xù)時間也各不相同，所以有必要來了解不同類型的病毒之間的差異。
一分鐘讀懂論文
表達(dá)最快：AAV1、6、7、8和9
表達(dá)中等：AAV4和5
表達(dá)最慢：AAV2和3
低表達(dá)：AAV2、3、4和5
中表達(dá)：AAV1、6和8
高表達(dá)：AAV7和9
AAV9最光譜，在所有組織中均表達(dá)，且表達(dá)水平很高
AAV7多種組織表達(dá)，但在大腦、睪丸、腎臟中無表達(dá)
AAV1主要在肝臟中表達(dá)，其次是心臟和后肢骨骼肌
AAV6主要在心臟中表達(dá)，其次是肺
AAV8主要在心臟中表達(dá)，其次是排腸肌、腘繩肌和肝臟
AAV2主要在肝臟中表達(dá)，其次是心臟和腘繩肌
AAV4主要在心臟中表達(dá)，其次是肺
AAV5僅在肝組織中表達(dá)
AAV3的表達(dá)水平更低，主要在心臟和肝臟中表達(dá)
文章解讀
在AAV1-9的包裝載體上添加熒光素酶基因cDNA，構(gòu)建不同血清型的AAV，尾靜脈（TV）注射后，在注射后的7、14、29、56和100天（days post-iniection,dpi）對注射不同的血清型動物進(jìn)行成像，通過luc的表達(dá)量測定不同血清型AAV的表達(dá)。
AAV1、6、7、8、9的表達(dá)量最快，luc的表達(dá)量在7dpi即可檢出；AAV4、AAV5的表達(dá)率適中，其表達(dá)在14dpi，AAV2、3的表達(dá)最為緩慢，只有在29dpi時，Luc的表達(dá)才能檢測出來。
AAV2、3、4、5為低表達(dá)組（Low-expressuon Group）,表達(dá)范圍5,000-200,000 photons/second/cm2；
AAV1、6、8為中表達(dá)組（Medium-expression Group）,表達(dá)范圍為15,000-200,000 photons/second/cm2
AAV7、9為表達(dá)組（Hight-expression Group）High-expression Group，表達(dá)范圍為10,000-1,000,000 photos/second/cm2
AAV9最光譜，在所有組織中均表達(dá)，且表達(dá)水平很高；
AAV7多種組織中表達(dá)，但在大腦、睪丸、腎臟中無表達(dá)；
AAV1主要在肝臟中表達(dá)，其次是心臟和后肢骨骼肌；
AAV6主要在心臟中表達(dá)，其次是肺；
AAV8主要在心臟中表達(dá)，其次是排腸肌、腘繩肌和肝臟
AAV2主要在肝臟中表達(dá)，其次是心臟和腘繩肌
AAV4主要在心臟中表達(dá)，其次是肺
AAV5僅在肝組織中表達(dá)
AAV3的表達(dá)水平更低，主要在心臟和肝臟中表達(dá)
本項目以AAV1型，6-9型小鼠為研究對象，采用免疫組化技術(shù)，分析其在AAV1型和6-9型的小鼠體內(nèi)的存留量，確定其在AAV1型和6-9型小鼠體內(nèi)的存流量。發(fā)現(xiàn)AAV1、AAV4的濃度在1-6h后降低較快，AAV6-8濃度降低較快，AAV9濃度降低較慢。48h后，每個血清中的初始表達(dá)量不到1%。
對100dpi后，不同血清型的組織樣本進(jìn)行了DNA測序，結(jié)果顯示，不同血清型組織樣本中，HBV的DNA序列有明顯的變化。
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6在進(jìn)行了100天的尾靜脈注射后，以超音波心動圖來評估其對心功能的作用，并發(fā)現(xiàn)所有被測的AAV血清型對心功能沒有影響。
總體來說，這篇文獻(xiàn)對AAV1-9血清型進(jìn)行了比較全面的試驗研究，對于剛接觸AAV的同學(xué)來說，看懂這篇論文會對不同的AAV血清型有個初步的了解，如果要進(jìn)一步深入學(xué)習(xí)，當(dāng)然要看更多的文獻(xiàn)。
看完了這篇被引用1000多次的論文還不過癮的同學(xué)，可以挑戰(zhàn)下這篇2019年2月1日發(fā)表與Nature Reviews Drug Discovery，影響因子64.797的文章“Adeno-associated virus vector as a platform for gene therapy delivery”，看完這篇文章，“凡爾賽文學(xué)”你也行。
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