眼科測(cè)試服務(wù)
以下是我司提供測(cè)試服務(wù)的設(shè)備以及一些已成功構(gòu)建的測(cè)試模型的簡(jiǎn)要介紹。
一、長(zhǎng)期微重力暴露所致眼損傷疾病動(dòng)物模型
探索構(gòu)建長(zhǎng)期微重力暴露所致眼部損傷疾病動(dòng)物模型的方法。
將 24 只 SD 大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。模型組采用 30°尾部懸吊后肢去負(fù)荷的方法進(jìn)行長(zhǎng)期微重力效應(yīng)的模擬，分別在造模4周和8周后，對(duì)相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜情況進(jìn)行檢查。采用視網(wǎng)膜電圖(ERG)和視覺(jué)誘發(fā)電位( VEP)檢測(cè)視網(wǎng)膜功能，采用 OCT和視網(wǎng)膜石蠟切片觀察視網(wǎng)膜形態(tài)，同時(shí)通過(guò)視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)進(jìn)行眼底血管觀察。
大鼠尾部懸吊處理 4周后，其視網(wǎng)膜功能和結(jié)構(gòu)并沒(méi)有發(fā)生明顯變化；而尾部懸吊處理 8周后，大鼠視網(wǎng)膜功能及形態(tài)發(fā)生明顯改變，具體表現(xiàn)為ERG暗適應(yīng)3.0反應(yīng)振幅明顯下降[(686.60±86.20)vs.(158.80±23.69)μV,P<0.05],VEP的P1波峰時(shí)值延長(zhǎng)[(89.83±4.98)vs.(96.67±4.41)ms,P<0.05]，OCT觀察眼底可見(jiàn)其外核層變薄[(35.13±1.02)vs.(20.32 ±1.92)μm，P<0.05]，眼底可見(jiàn)脈絡(luò)膜血管血流增多。
SD 大鼠尾部懸吊8周可以很好地模擬長(zhǎng)期微重力環(huán)境暴露所致眼部損傷，可作為該現(xiàn)象發(fā)病機(jī)制研究較好的疾病動(dòng)物模型。
OCT視網(wǎng)膜斷層結(jié)果顯示模型組視網(wǎng)膜外核層變薄、缺失，RPE層界面模糊，正常組視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)清晰，分界明顯，無(wú)明顯差異。
眼底照相未見(jiàn)明顯視乳頭水腫及棉絮斑等，但可見(jiàn)脈絡(luò)膜血流增多，F(xiàn)FA造影未見(jiàn)明顯性差異。
ERG波形顯示正常組五項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)波形標(biāo)準(zhǔn)完整，具有典型的波形，顯示視網(wǎng)膜功能完整，模型組五項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)波形趨近于直線，顯示視網(wǎng)膜功能不完整。
二、光化學(xué)法建立視網(wǎng)膜分支靜脈阻塞大鼠模型
觀察光化學(xué)法構(gòu)建視網(wǎng)膜分支靜脈阻塞(branch retinalvein occlusion,BRVO)大鼠模型的自然病程和不良事件。
選取 30 只 SD(Sprague Dawley)大鼠尾靜脈注射孟加拉紅1min 后,532nm 激光(80mW,100um,100ms)于視盤(pán)顳側(cè)視網(wǎng)膜靜脈二級(jí)分叉處進(jìn)行單光點(diǎn)光凝 50點(diǎn)建立 BRVO 模型。分別于1、3、7、14、21和28d檢測(cè)全視野視網(wǎng)膜電圖(electroretinogram,ERG)、熒光素眼底血管造影(fundus fluorescein angiography,FFA)和相干光斷層掃(optical coherence tomography, OCT)。
光凝后,3 只大鼠死亡,3 只嚴(yán)重出血導(dǎo)致視網(wǎng)膜大部分脫離,1只出現(xiàn)視網(wǎng)膜凹陷,1只白內(nèi)障。FFA 和眼底(熒光)彩照發(fā)現(xiàn) BRVO 大鼠模型造模成功率為73%(22/30),1d 時(shí)近端變粗,遠(yuǎn)端變細(xì),3-7d 光凝血管完全再通。ERG 示光凝1d 后暗適應(yīng) 3.0 反應(yīng)b波降低至正常眼的 0.694±0.042 倍,5-7d 下降至最低點(diǎn)約為正常眼 0.487±0.064倍,之后開(kāi)始上升,21d 上升至初始值0.708±0.0465 倍OCT在體水平發(fā)現(xiàn)第 1d視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層和外核層水腫,3-5d水腫消失且激光光凝點(diǎn)視網(wǎng)膜附近 250um 外核層開(kāi)始凋亡變薄,到 21d 外核層變薄只剩 3-4 層細(xì)胞。
激光光凝制作 BRVO 模型是一種切實(shí)可行的方法,其疾病的演變和發(fā)展可以部分模擬人體 BRVO 的進(jìn)程。同時(shí)由于造模成功率較低以及激光光凝相關(guān)并發(fā)癥較多,在實(shí)際使用中有待進(jìn)一步改進(jìn)方法。
OCT檢查定量分析顯示損傷部位視網(wǎng)膜厚度隨著時(shí)間變化呈先腫脹在變薄最后厚度在有所恢復(fù)。
眼底彩照及FFA造影結(jié)果可見(jiàn)1d時(shí)靜脈血管還處于阻塞狀態(tài)血管變細(xì)，出現(xiàn)血液斷流現(xiàn)象，3d后血管再通但是血管還處于很細(xì)狀態(tài)隨著時(shí)間變化血管逐漸呈變粗趨勢(shì)。
最大混合反應(yīng)ERGb波(d3.0)，在3d是幅值處于較低水平顯示出靜脈阻塞導(dǎo)致視網(wǎng)膜整體功能不好，但是時(shí)間的延長(zhǎng)，靜脈阻塞處自通，視網(wǎng)膜回復(fù)正常功能，視電幅值、峰時(shí)也處于較正常水平。
三、藥物誘導(dǎo)視網(wǎng)膜色素變性模型
觀察藥物誘導(dǎo)鼠視網(wǎng)膜變性模型的眼底形態(tài)學(xué)變化特點(diǎn)，著重關(guān)注色素上皮層變化情況。
腹腔注射mnu為例
27只C57小鼠隨機(jī)分成3組，即正常組、MNU低劑量組、MNU高劑量組，每組9只。MNU低劑量組、高劑量組給予MNU40mg/kg,60mg/kg腹腔注射，正常組不做任何處理。分別于實(shí)驗(yàn)后第1天，3天，7天應(yīng)用眼科超顯微成像系統(tǒng)+視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)進(jìn)行眼底彩照、熒光素鈉血管造影(FFA)、OCT檢測(cè)。
MNU低劑量組、高劑量組FFA檢測(cè)在實(shí)驗(yàn)后7天內(nèi)未發(fā)現(xiàn)明顯改變，未出現(xiàn)眼底血管滲漏影(附圖1)。OCT檢測(cè)結(jié)果顯示，造模后1天MNU低劑量組、高劑量組均出現(xiàn)外核層(ONL)呈高高影，與正常組ONL的低密度黑影呈明顯對(duì)比，但厚度未出現(xiàn)明顯改變(正常組、MNU低劑量組、高劑量組分別為81.40±0.29μm,80.73±0.90μm,80.40±2.62μm,F=0.771,兩兩間P>0.05)造模后3天ONL開(kāi)始出現(xiàn)變薄，MNU低劑量組ONL厚度較高劑量組的厚(正常組、MNU低劑量組、高劑量組分別為82.47±0.85μm,52.27±0.39μm,42.03±0.99 μm,F<0.000,兩兩間P<0.01),直到7天時(shí)ONL幾乎消失;(82.77±0.52μm,17.367±0.44μm,12.87±0.77μm)(附圖2)。眼底彩照結(jié)果可見(jiàn)MNU低劑量組、高劑量組眼底色素上皮層從實(shí)驗(yàn)3天后開(kāi)始出現(xiàn)紊亂、缺失，視網(wǎng)膜血管變細(xì)變白、硬化，甚至閉鎖萎縮，視盤(pán)變凸反光增強(qiáng)，呈劑量效應(yīng)7天時(shí)兩組間眼底改變程度相似(附圖3)。
MNU誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜變性模型除了視網(wǎng)膜外核層凋亡外，色素上皮層也有明顯病變，7可作為視網(wǎng)膜色素變性中色素上皮素層損傷模型。
OCT檢測(cè)結(jié)果顯示，造模后1天MNU低劑量組、高劑量組均出現(xiàn)外核層（ONL）呈高亮影，與正常組ONL的低密度黑影呈明顯對(duì)比，但厚度未出現(xiàn)明顯改變；造模后3天ONL開(kāi)始出現(xiàn)變薄，MNU低劑量組ONL厚度較高劑量組的厚。
注：色素變化
眼底彩照結(jié)果可見(jiàn)從實(shí)驗(yàn)1到3天后開(kāi)始出現(xiàn)紊亂、缺失，眼底血管變細(xì)變白，視盤(pán)變凸反光增強(qiáng)，呈劑量效應(yīng)；7天時(shí)色素呈花斑狀，正常組眼底色素、血管未見(jiàn)明顯變化。
注：FFA變化
MNU低劑量組、高劑量組FFA檢測(cè)在實(shí)驗(yàn)后7天內(nèi)未發(fā)現(xiàn)明顯改變，未出現(xiàn)眼底血管滲漏影。
四、視網(wǎng)膜光損傷模型
建立和研究視網(wǎng)膜光損傷動(dòng)物模型,觀察較強(qiáng)可見(jiàn)光對(duì)大鼠視網(wǎng)膜光損傷的病理變化。
公司提供的光損傷設(shè)備,取健康成年SD大鼠35只,隨機(jī)分成正常對(duì)照組(CON).光損傷后1 d(D1)、3 d(D3)、5 d(D5)、7 d(D7)組,每組7只,各組大鼠在12 h明12h暗環(huán)境中飼養(yǎng)7 d,然后暗適應(yīng)36 h。D1、D3、D5、D7組大鼠采用4178 Lux照度的可見(jiàn)光進(jìn)行12 h間歇光照射,連續(xù)3 d,總計(jì)36 h,然后在正常環(huán)境中分別飼養(yǎng)1 d、3d、5 d和7 d。大鼠麻醉進(jìn)行活體觀察視覺(jué)電生理、眼彩照及FFA熒光造影、OCT斷層檢查。
正常大鼠視網(wǎng)膜OCT結(jié)構(gòu)層次清楚,內(nèi)、外節(jié)視桿排列整齊、規(guī)則。眼底照相未見(jiàn)明顯視乳頭水腫及棉絮斑等，但可見(jiàn)脈絡(luò)膜血流增多，F(xiàn)FA造影未見(jiàn)明顯性差異，視覺(jué)電生理各項(xiàng)指標(biāo)幅值均降低，OPS出現(xiàn)少波現(xiàn)象。
采用4178 Lux照度的可見(jiàn)光較長(zhǎng)時(shí)間(36 h)間歇照射可誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜光損傷，成功地模擬了大鼠視網(wǎng)膜光損傷模型。在光損傷的早期,即出現(xiàn)形態(tài)的變化,并隨著時(shí)間的延長(zhǎng)損傷逐漸加重。
正常組大鼠視網(wǎng)膜OCT 成像各層結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯異常，外、內(nèi)核層結(jié)構(gòu)清晰均成低密度影；模型組大鼠視網(wǎng)膜OCT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)大鼠出現(xiàn)外核層（ONL）呈較高亮影，與正常組ONL的低密度黑影呈明顯對(duì)比，但厚度未出現(xiàn)明顯改變。
注：眼底彩照及FFA變化
眼底彩照及FFA未見(jiàn)明顯變化
正常組與模型組比較，模型組五項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)都有較大程度幅值降低清理OPs波出現(xiàn)少波和幅值降低情況顯示出光損傷導(dǎo)致視網(wǎng)膜整體功能不好。
五、脈絡(luò)膜新生血管模型
探索構(gòu)建動(dòng)物眼底脈絡(luò)膜新生血管模型的方法。
使用 532nm波長(zhǎng)的激光，在遠(yuǎn)離視神經(jīng)(100um,125mv 0.1s)的眼底 1.5-2.0視盤(pán)直徑上進(jìn)行激光光凝。有氣泡產(chǎn)生(證明擊破Bruch膜)，且無(wú)出血的激光斑作為有效光斑。分別于實(shí)驗(yàn)后第1d應(yīng)用眼科超顯微成像系統(tǒng)和視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)、視覺(jué)電生理儀進(jìn)行眼底彩照、熒光素鈉血管造影(FFA)、OCT檢測(cè)、ERG檢查。
OCT結(jié)果顯示損傷點(diǎn)脈絡(luò)膜向內(nèi)層隆起或向下?lián)p傷，并且脈絡(luò)膜層分離形成空隙或完全損壞。眼底彩照結(jié)果可見(jiàn)眼底有五處脈絡(luò)膜損傷點(diǎn)，損傷點(diǎn)外圍邊緣呈白色。FFA造影顯示損傷點(diǎn)隨著熒光充盈呈現(xiàn)出高亮、團(tuán)狀的形狀。
C57鼠可以很好地模擬脈絡(luò)膜新生血管眼部損傷，可作為該現(xiàn)象發(fā)病藥理研究較好的疾病動(dòng)物模型。
OCT結(jié)果顯示損傷點(diǎn)脈絡(luò)膜向內(nèi)層隆起或向下?lián)p傷，并且脈絡(luò)膜層分離形成空隙或完全損壞。
眼底彩照結(jié)果可見(jiàn)眼底有五處脈絡(luò)膜損傷點(diǎn)，損傷點(diǎn)外圍邊緣呈白色。FFA造影顯示損傷點(diǎn)隨著熒光充盈呈現(xiàn)出高亮、團(tuán)狀的形狀。
六、維持生理鹽水造成前房高眼壓致青光眼的模型
觀測(cè)通過(guò)生理鹽水維持前房高眼壓致青光眼的模型眼底的變化。
將 24 只 SD 大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。模型組采用生理鹽水維持前房高眼壓致青光眼操作，正常組不做任何處理，分別在造模7d/14d/21d/28d后，對(duì)相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜情況進(jìn)行檢查。應(yīng)用眼科超顯微成像系統(tǒng)和視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)、視覺(jué)電生理儀進(jìn)行眼底彩照、熒光素鈉血管造影(FFA)OCT檢測(cè)、ERG檢查
OCT7d時(shí)視網(wǎng)膜外核層小時(shí)變薄，各層界限模糊14d-28d外核層隨時(shí)間變化變薄的同事內(nèi)界膜到內(nèi)核層也逐漸變薄，斷層清晰度也逐漸降低。由眼底彩照可知，大鼠前房灌注維持4h0-7天眼底血管未見(jiàn)明顯變化，眼底顏色變白14d-28d視盤(pán)變凸，眼底血管變細(xì)變白呈，視網(wǎng)膜顏色從紅潤(rùn)到白色驟變,屈光介質(zhì)模糊不清。
SD大鼠通過(guò)生理鹽水維持前房高眼壓致青光眼模型可作為該發(fā)病藥理研究較好的疾病動(dòng)物模型。
OCT7d時(shí)視網(wǎng)膜外核層小時(shí)變薄，各層界限模糊14d-28d外核層隨時(shí)間變化變薄的同事內(nèi)界膜到內(nèi)核層也逐漸變薄，斷層清晰度也逐漸降低。
由眼底彩照可知，大鼠前房灌注維持4h0-7天眼底血管未見(jiàn)明顯變化，眼底顏色變白。14d-28d視盤(pán)變凸，眼底血管變細(xì)變白呈，視網(wǎng)膜顏色從紅潤(rùn)到白色驟變,屈光介質(zhì)模糊不清。
七、STZ藥物誘導(dǎo)視網(wǎng)膜糖尿病模型
本研究旨在對(duì)鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變糖尿病進(jìn)行眼底變化評(píng)價(jià)。
雄性 SD 大鼠 75 只，隨機(jī)分為空白組(30 只)和糖尿病組(45 只) 。采 用次 性大劑量 腹 腔 注 射 STZ60 mg/kg 的方法制備糖尿病模型 應(yīng)用眼科超顯微成像系統(tǒng)和視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)、視覺(jué)電生理儀進(jìn)行眼底彩照、熒光素鈉血管造影(FFA)、OCT檢測(cè)、ERG檢查。
OCT正常組、模型組早期視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)清晰、完整各層界限清楚未見(jiàn)有層次缺失。但是隨著生長(zhǎng)周期延長(zhǎng)，大鼠眼睛出現(xiàn)白內(nèi)障情況，OCT視網(wǎng)膜斷層結(jié)構(gòu)模糊甚至出現(xiàn)斷層信息不顯影情況。眼底彩照及FFA早期未見(jiàn)明顯區(qū)別，但是隨著生長(zhǎng)周期延長(zhǎng)，大鼠眼睛出現(xiàn)白內(nèi)障情況，眼底彩照及FFA出現(xiàn)不顯影情況。
鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變檢測(cè)形態(tài)學(xué)指標(biāo)無(wú)明顯差異，但是血糖及其他指標(biāo)符合該病癥也可作為該現(xiàn)象發(fā)病機(jī)制研究較好的疾病動(dòng)物模型。
OCT正常組、模型組早期視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)清晰、完整各層界限清楚未見(jiàn)有層次缺失。但是隨著生長(zhǎng)周期延長(zhǎng)，大鼠眼睛出現(xiàn)白內(nèi)障情況，OCT視網(wǎng)膜斷層結(jié)構(gòu)模糊甚至出現(xiàn)斷層信息不顯影情況
眼底彩照及FFA早期未見(jiàn)明顯區(qū)別，但是隨著生長(zhǎng)周期延長(zhǎng)，大鼠眼睛出現(xiàn)白內(nèi)障情況，眼底彩照及FFA出現(xiàn)不顯影情況。
采用彌散光照明法早期正常組和模型組眼表及晶體未發(fā)現(xiàn)明顯異常，隨著模型生長(zhǎng)周期，模型加重可以看到正常組虹膜結(jié)構(gòu)清晰完整，散瞳后屈光介質(zhì)透徹，模型組出現(xiàn)晶體白裂狀況，屈光介質(zhì)渾濁甚至白裂。
八、中心性漿液性視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜模型
采用兔耳緣靜脈注射腎上腺素的方法建立中心性漿液性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變(CSC)動(dòng)物模型,為CSC發(fā)病機(jī)制和防治研究提供動(dòng)物模型。
分別選取雄性青紫藍(lán)免10只,采用耳緣靜脈注射熒光素鈉法行熒光素眼底血管造影(FFA),排除眼底血管病變.青紫藍(lán)兔均每天經(jīng)耳緣靜脈注射腎上素0.04mg/kg.實(shí)驗(yàn)兔每周行FFA,分別于注射后4、8和12周采用OCT觀察實(shí)驗(yàn)免視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)。
10只青紫藍(lán)兔在注射后8周內(nèi)共有7只眼出現(xiàn)眼底熒光素滲漏、RPE脫色素、局部視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層脫離。
靜脈注射腎上腺素在有色兔可誘導(dǎo)出CSC樣病變,而在白化兔上無(wú)法誘導(dǎo)出CSC樣病變。
OCT正常組視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)清晰、完整各層界限清楚未見(jiàn)有層次缺失,脈絡(luò)膜位置未出現(xiàn)病變特征。模型組視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)不清晰、完整各層界限較模糊清,脈絡(luò)膜位置出現(xiàn)層次隆起、水腫等病變特征。
九、基因型糖尿病視網(wǎng)膜病變模型
使用視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)觀察ZDF糖尿病模型眼底變化。
購(gòu)買(mǎi)維持糖尿病模型癥狀1個(gè)月雄性ZDF大鼠6只，3只糖尿病組、3只對(duì)照組SPF級(jí)，體質(zhì)200+20g，周齡7-8周。
使用視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)采用眼底彩照及FFA功能分別活體、連續(xù)觀察1個(gè)月、1個(gè)半月、2個(gè)月周期，檢測(cè)眼底彩照及FFA熒光造影變化。
眼底彩照及FFA熒光造影變化
糖尿病組與正常組對(duì)比眼底彩照未發(fā)現(xiàn)明顯異常，糖尿病組遠(yuǎn)離視盤(pán)部分區(qū)域有點(diǎn)狀高亮度、白色絮狀熒光現(xiàn)象，正常組正常。FFA造影顯示糖尿病組1個(gè)月、1個(gè)半月眼底有點(diǎn)狀，棉絮狀熒光堆積滲漏，2個(gè)月后出現(xiàn)大面積熒光滲漏，但正常組眼底未見(jiàn)明顯滲漏區(qū)域。
視網(wǎng)膜成像系統(tǒng)能明顯的觀察ZDF大鼠糖尿病視網(wǎng)膜病變模型眼底的變化，且ZDF鼠模型可作為研究糖尿病視網(wǎng)膜病變研究的動(dòng)物模型。
糖尿病組與正常組對(duì)比眼底彩照未發(fā)現(xiàn)明顯異常，但是糖尿病組遠(yuǎn)離視盤(pán)部分區(qū)域有點(diǎn)狀高亮度、白色絮狀熒光現(xiàn)象（如紅色箭頭），正常組未發(fā)現(xiàn)。FFA熒光造影顯示糖尿病組1個(gè)月和1個(gè)半月出現(xiàn)有點(diǎn)狀，棉絮狀熒光堆積滲漏（如黃色箭頭），2個(gè)月眼底出現(xiàn)大面積熒光滲漏（如黑色箭頭），但正常組眼底未見(jiàn)明顯滲漏區(qū)域。
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