慢病毒

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簡介

慢病毒載體(lentivirus vector，LV)屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科(Retrovidae)，為 RNA病毒。區(qū)別一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。慢病毒載體的研究發(fā)展得很快，研究的也非常深入。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達到持久性表達。
感染能力方面可有效地感染神經(jīng)元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內(nèi)皮細胞、干細胞等多種類型的細胞，從而達到良好的的基因治療效果，在美國已經(jīng)開展了臨床研究，效果非常理想，因此具有廣闊的應(yīng)用前景。

優(yōu)勢

慢病毒與其他病毒工具比較，具有以下優(yōu)勢：
1）表達時間長：慢病毒通過將外源基因整合到宿主細胞基因組上，可實現(xiàn)目的基因長時間穩(wěn)定的表達，不隨著細胞分裂傳代而丟失，是細胞實驗的首選；
2）安全性高：未發(fā)現(xiàn)致病性，已被用于CAR-T 治療作用于人體；
3）免疫原性低：直接注射活體組織不易造成免疫反應(yīng)，適用于動物實驗。

不同病毒的生物學(xué)特性比較

載體選擇
　　宣尊生物擁有豐富的慢病毒產(chǎn)品，用于操作編碼基因和非編碼基因，如lncRNA、microRNA、circRNA，如下慢病毒載體可供您選擇（不限于此列表）：

調(diào)控方式	載體編號	載體名稱（載體元件順序）	真核抗性	熒光	啟動子	默認標簽	載體容量
過表達	GL127	pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-WPRE	N/A	EGFP	CMV	3FLAG	4.8kb
	GL121	pSLenti-EF1-EGFP-CMV-MCS-WPRE	N/A	EGFP	CMV	N/A	4.4kb
	GL129	pSLenti-CMV-mCherry-3xFLAG-WPRE	N/A	mCherry	CMV	3FLAG	4.8kb
	GL119	pSLenti-CMV-MCS-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE	Puro	N/A	CMV	3FLAG	4.4kb
	GL120	pSLenti-SFH-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE	Puro	EGFP	CMV	3FLAG	3.5kb
	GL107	pSLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE	Puro	EGFP	CMV	3FLAG	3.7kb
	GL109	pSLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE	Puro	EGFP	CMV	N/A	3.8kb
	GL122	pSLenti-EF1-EGFP-F2A-BSR-CMV-MCS-WPRE	blasticidin	EGFP	CMV	N/A	3.9kb
	GL130	pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE	Puro	EGFP	CMV	3FLAG	3.7kb
	GL132	pSLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-WPRE2-CMV-MCS	Puro	EGFP	CMV	N/A	3.7kb
	GL123	pSLenti-EF1-mCherry-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPRE	Puro	mCherry	CMV	3FLAG	3.7kb
	GL125	pSLenti-CMV-mCherry-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE	Puro	mCherry	CMV	3FLAG	3.7kb
	GL133	pSLenti-EF1-mCherry-F2A-Puro-WPRE2-CMV-MCS	Puro	mCherry	CMV	N/A	3.7kb
	H114	pLenti-CMV-Luc2-IRES-Puro-WPRE	Puro	N/A	CMV	N/A	2.2kb
	GL124	pSLenti-EF1-Luc2-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE	Puro	N/A	CMV	N/A	2.8kb
表達cre	H126	pLenti-CMV-NLS-Cre-3xFLAG-WPRE	N/A	N/A	CMV	3FLAG	3.9kb
表達cre	H15108	pLenti-CMV-DIO-MCS-WPRE	N/A	N/A	CMV	3FLAG	5.3kb
三標	H7656	pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-mNeonGreen-F2A-Puro-WPRE	Puro	mNeonGreen	CBh	3FLAG	1.3kb
	H7657	pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-tdTomato-F2A-Puro-WPRE	Puro	tdTomato	CBh	3FLAG	0.6kb
	H9911	pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-mNeonGreen-F2A-BSR-WPRE	blasticidin	mNeonGreen	CBh	3FLAG	1.5kb
	H9912	pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-tdTomato-F2A-BSR-WPRE	blasticidin	tdTomato	CBh	3FLAG	0.8kb
circRNA過表達	H8384	pLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-S-circRNA-WPRE	N/A	EGFP	CMV	N/A	3.0kb
	H8807	pLenti-CMV-S-circRNA-WPRE	N/A	N/A	CMV	N/A	4.8kb
	H8399	pLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-L-circRNA-WPRE	Puro	EGFP	CMV	N/A	1.0kb
	H8810	pLenti-CMV-L-circRNA-WPRE	N/A	N/A	CMV	N/A	2.8kb
miRNA過表達	GL109	pSLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS-WPRE	Puro	EGFP	CMV	N/A	N/A
	H3919	pCLenti-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE	Puro	EGFP	U6	N/A	N/A
	H119	pLenti-CMV-TurboGFP-IRES-Puro-miR30(miRNA)-WPRE	Puro	TurboGFP	CMV	N/A	N/A
	H3928	pCLenti-U6-miR30(miRNA)-CMV-mCherry-F2A-Puro-WPRE	Puro	mCherry	U6	N/A	N/A
	H146	pCLenti-EF1-Puro-CMV-EGFP-3xFLAG-Sponge(miRNA)-WPRE	Puro	EGFP	CMV	3FLAG	N/A
	H7505	pCLenti-U6-TuD(miRNA)-CMV-EGFP-F2A-BSR-WPRE	blasticidin	EGFP	CMV	N/A	N/A
	H7506	pCLenti-U6-TuD(miRNA)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE	Puro	EGFP	CMV	N/A	N/A
過表達（Tet-on）	H125	pLenti-TRE-EGFP-EF1-rtTA3-IRES-Puro-WPRE	Puro	EGFP	TRE	N/A	2.0kb
	H121	pLenti-TRE-EGFP-3xFLAG-PGK-Puro-WPRE	Puro	EGFP	TRE	3FLAG	3.3kb
	H2057	pLenti-EF1-rtTA3-IRES-Puro-WPRE	Puro	N/A	EF1	N/A	N/A
shRNA干擾	GL401	pCLenti-U6-shRNA-CMV-Puro-WPRE	Puro	N/A	U6	N/A	N/A
	GL404	pCLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-WPRE	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
	GL427	pSLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE	Puro	EGFP	U6	N/A	N/A
	GL428	pSLenti-U6-shRNA-CMV-mCherry-F2A-Puro-WPRE	Puro	mCherry	U6	N/A	N/A
	H7615	pCLenti-U6-shRNA-CMV-mCherry-F2A-BSR-WPRE	blasticidin	mCherry	U7	N/A	N/A
CRISPR敲除	H5070	pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE	Puro	N/A	U6	N/A	N/A
	H7072	pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-BSR-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE	blasticidin	N/A	U6	N/A	N/A
	H6825	pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE	N/A	sfGFP	U6	N/A	N/A
	H5068	pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE	N/A	EGFP	U7	N/A	N/A
	H5450	pLenti-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-espCas9_1.1-WPRE	Puro	N/A	CMV	3FLAG	N/A
CRISPRa轉(zhuǎn)錄激活	H9517	pCLenti-U6-gRNA-MS2-EFS-dCas9-VP64-T2A-BSD-WPRE	blasticidin	N/A	U6	N/A	N/A
	E2577	pCLenti-EF1a-MCP-P65-HSF1-T2A-Hygro-WPRE	hygromycin	N/A	EF1a	N/A	N/A
	H7284	pCLenti-U6-gRNA-2x(wt+f6)MS2-CMV-MCP-P65-HSF1-IRES-BSR-WPRE	blasticidin	N/A	U6/CMV	N/A	N/A
	H7281	pLenti-CMV-dCas9-VP64-T2A-Puro-WPRE	Puro	N/A	CMV	N/A	N/A

應(yīng)用

1）將目的基因?/RNAi?基因轉(zhuǎn)入難以轉(zhuǎn)染的細胞，比如神經(jīng)元細胞、干細胞或其它原代細胞；
2）將目的基因?/RNAi?基因轉(zhuǎn)入動物組織，以期獲得長期表達；
3）構(gòu)建穩(wěn)定表達目的蛋白?/RNAi?的細胞系，再用exvivo的方法導(dǎo)入動物體內(nèi)；
4）基因治療；
5）轉(zhuǎn)基因動物；?
6）基因敲除；
7）藥物研究：構(gòu)建表達受體蛋白的細胞系，研究藥物的作用；?
8）快速建立生產(chǎn)目的蛋白的細胞系，非常有前途的真核細胞表達方法。

　　常見MOI列表

細胞名	中文名稱	慢病毒感染MOI （參考值）
MGC80-3	人胃癌細胞	10
HT-29	人結(jié)腸癌細胞	20
RKO	人結(jié)腸腺癌細胞	10
Caki-1	人腎透明細胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細胞	10
5637	人膀胱癌細胞	10
U-118 MG	人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤	10
RWPE-1	人正常前列腺上皮細胞	20
HeLa	人宮頸癌細胞	10~20
Ca Ski	人宮頸癌腸轉(zhuǎn)移細胞	10
MCF7 [MCF-7]	人乳腺癌細胞	10
A549	人非小細胞肺癌細胞	10
NCI-H1299	人非小細胞肺癌細胞	20
U-87 MG	人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤	10
U251	人膠質(zhì)瘤細胞	10
A172	人膠質(zhì)母細胞瘤細胞	10
K-562	人慢性髓原白血病細胞	10
HL-60	人原髓細胞白血病細胞	10
GES-1	人胃上皮細胞	20
U266	人骨髓瘤細胞	20
CAL 27	人舌鱗癌細胞	20
PC9	人肺癌細胞	5
PC14	人肺癌細胞	10
MADB-106	大鼠乳腺癌細胞	20
F98	大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞	20
MHCC-97H	人肝癌細胞（高轉(zhuǎn)移）	10~20

　
　　MOI 是multiplicity of infection 的縮寫，即感染復(fù)數(shù)，其含義是感染時病毒與細胞的數(shù)量比值，一般以實驗中某個細胞，感染達到80%，定義為這個細胞的MOI值，即病毒量與細胞數(shù)的比值；加的病毒量(μl)=細胞數(shù)×MOI/滴度(…/ml) ×1000

慢病毒在腫瘤研究中的應(yīng)用案例

1.Nature Communications. (IF=12.353). Shi Y,et.al. (2017). Tumour-associated macrophages secrete pleiotrophin to promote PTPRZ1 signalling in glioblastoma stem cells for tumour growth.[慢病毒, 膠質(zhì)細胞瘤]
慢病毒干擾： Lenti-shNT/shPTN/shPTPRZ1

2. Hepatology. (IF=14.079). Ma JZ,et.al. (2016). METTL14 suppresses the metastatic potential of HCC by modulating m6 A-dependent primary miRNA processing. [慢病毒, 肝癌]
慢病毒過表達/干擾：pLV-CMV-PGK-EGFP-T2A-puro/ pLV-U6-shRNA-CMV-EGFP-T2A-puro

慢病毒在神經(jīng)系統(tǒng)的應(yīng)用（在體注射）
1．Nature Neuroscience. (IF=19.912). Ding XL,et.al. (2017). Activity-induced histone modifications govern Neurexin-1 mRNA splicing and memory preservation. [慢病毒, 學(xué)習(xí)與記憶]

病毒類型：慢病毒
載體名稱：LV-Suv39h1-RNAi（不確定詳細的）
注射部位：海馬DG區(qū)
病毒注射量：2 μL，9.98 × 10⁸ TU/mL
檢測時間：2周

2．Nature Communications. (IF=12.353). Yao XH,et.al. (2016). Electrical coupling regulates layer 1 interneuron microcircuit formation in the neocortex. [慢病毒, 神經(jīng)環(huán)路]

病毒類型：慢病毒
載體名稱：LV- CX36-shRNA-EGFP（不確定詳細的）
注射部位：P1小鼠新皮層L1
病毒注射量：1μL
檢測時間：2周
3．Molecular Psychiatry. (IF=11.64). Guo DJ,et.al. (2019). Autism-like social deficit generated by Dock4 deficiency is rescued by restoration of Rac1 activity and NMDA receptor function. [慢病毒, 自閉癥]

病毒類型：慢病毒
載體名稱：Lenti-CMV-EGFP-P2A-3FLAG-Rac1
注射部位：小鼠海馬CA1區(qū)
病毒注射量：1μL
檢測時間：4周

慢病毒延伸服務(wù)

宣尊生物慢病毒的生產(chǎn)和質(zhì)控采取了國際學(xué)術(shù)界公認的標準流程，采用三質(zhì)?；蛩馁|(zhì)粒系統(tǒng)在293T細胞中進行包裝。所獲得的病毒顆粒經(jīng)過超速離心純化，并通過qPCR對病毒基因拷貝進行滴定。一般情況下我們的慢病毒的滴度在10⁸~10⁹TU/ml，完全可以滿足各類實驗的使用要求。

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