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AAV 重慶宣尊生物科技有限公司
病毒載體的改造

病毒載體的改造

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   基礎研發(fā)目前的主要研究方向為慢病毒(LV)載體改造、腺病毒(ADV)容量改造、腺相關病毒(AAV)血清型篩選、特異性啟動子優(yōu)化、以在體應用為核心的CRISPR/Cas9技術綜合開發(fā)以及其它的生物學研究工具的研發(fā)。
  病毒載體是實現(xiàn)基因遞送、完成基因操作的關鍵環(huán)節(jié),因此,對病毒載體的改造在研究和應用中有著特殊的重要地位。宣尊生物研發(fā)部針對病毒載體的改造主要包括腺相關病毒的體內(nèi)應用改造,包括數(shù)十種靶向特異器官血清型、多種類型的AAV血清型文庫、慢病毒和腺病毒的改造。
  現(xiàn)在研究中常用的rAAV就是利用AAV2型基因組與不同的衣殼蛋白結合產(chǎn)生的混合體病毒載體,一般標記為rAAV2/N (N為不同的衣殼血清型)。重組的病毒具有AAV2型的穩(wěn)定表達和基因整合能力,同時獲得了不同血清型的組織感染嗜親性(不同血清型衣殼表面的特定結構位點決定了各自受體的特異性),表現(xiàn)出一定的器官靶向特異性。
  不同血清型AAV的組織嗜親性  

血清型組織親和性
rAAV2/1神經(jīng)系統(tǒng)(高滴度順向跨突觸),肌肉,骨骼肌,心肌,平滑肌
rAAV2/2神經(jīng)系統(tǒng),肌肉,肝臟,血管平滑肌,眼
rAAV2/3肌肉,肝臟,肺,眼
rAAV2/4神經(jīng)系統(tǒng),肌肉,眼,腦
rAAV2/5神經(jīng)系統(tǒng),肺,視網(wǎng)膜,肝臟,滑膜關節(jié)
rAAV2/6神經(jīng)系統(tǒng),肺,肌肉,心臟
rAAV2/7肌肉,肝臟
rAAV2/8神經(jīng)系統(tǒng),肝臟,胰腺,視網(wǎng)膜,脂肪組織
rAAV2/9神經(jīng)系統(tǒng),心肌,肺,視網(wǎng)膜,皮膚,肌肉,脂肪組織
rAAV2-retro神經(jīng)系統(tǒng)(逆向非跨突觸)
AAV-PHP.eB跨血腦屏障(靜脈注射)
AAV-PHP.S全外周神經(jīng)(尾靜脈注射)
AAV-PAN胰腺(腹腔注射)
AAV-LUNG肺(尾靜脈注射)
AAV-DJ視網(wǎng)膜,肺,腎臟,體外感染細胞
AAV-7m8視網(wǎng)膜
AAV-ShH10Y視網(wǎng)膜Muller細胞
AAV-Rh10肝臟,血液,心臟,體外感染細胞
AAV-Anc80L65內(nèi)耳、視網(wǎng)膜、骨骼肌、肝臟
AAV-SCH9SVZ區(qū)神經(jīng)干細胞
AAV-2M視網(wǎng)膜
AAV-BR1腦血管內(nèi)皮細胞
AAV6-TM6小膠質(zhì)

  

靶向特異器官AAV血清型感染案例  


1、rAAV2-retro:神經(jīng)系統(tǒng)(逆向非跨突觸)

  

注射部位:小鼠BPN  

注射方式:腦定位注射  

載體:rAAV2-retro-hSyn-EYFP  

觀察時間:4周  


2、AAV-PHP.eB:神經(jīng)系統(tǒng)全腦表達(跨血腦屏障)   

注射方式:尾靜脈注射  

載體:pAAV-CMV-mScarlet-3FLAG & pAAV-CMV-mNeonGreen-3FLAG  

血清型:AAV-PHP.eB  

病毒滴度:1.10×1013VG/mL & 2.35×1013 VG/mL  

注射體積:200nl(注射病毒總量:1.5×1011 VG)  

觀察時間:3周 


 3、AAV-PAN:特異性感染胰腺  4、AAV-LUNG:特異性感染肺部  

注射方式:尾靜脈注射

載體:pAAV-CMV-mScarlet-3FLAG
血清型:AAV-LUNG
注射量: 2x1011 VG /只(滴度:1.49 x1013 VG/mL),
注射體積:200 uL
觀察時間:3周


  5、AAV-DJ體外感染293T細胞


AAV-DJ(MOI=105)                                               AAV8(MOI=10


 



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