（1）腹腔麻醉
    把異氟烷和脂肪乳混合做成乳化異氟烷，腹腔注射，3分鐘麻醉，30分鐘清醒。
（2）吸入麻醉
    將大鼠封入密封缸中，注入液態(tài)吸入麻醉藥。
（3）經(jīng)口氣管插管
    腹腔麻醉，四肢仰面固定，上下切牙用絲線系住作牽引，操作者頭戴額鏡，對面放置好光源，牽出舌頭和下切牙絲線一起由左手捏住，上切牙絲線由助手提著或用止血鉗夾住用自己的前胸固定，拉動絲線使頭部上提和口充分張開，右手持18G或16G套管針，看到聲門既可插管。

（1）小鼠需要固定好，頭和軀體要保持一條直線，并且灌胃時使小鼠成豎直位，頭向上；
（2）灌胃劑量可選0.1 mL/10 g或0.2 mL/10 g，根據(jù)實際情況決定，防止小鼠灌胃后俯臥喘息；
（3）操作前將灌胃針安在注射器上大致測量一下從口腔到胃內(nèi)的位置的長度,根據(jù)此距離確定插入深度,成年小鼠插入大約3 cm；
（4）從小鼠的嘴角進針，進去后讓灌胃針順著小鼠的上腭壓住它的舌頭進入食道，當中有突破感，突破感過后和灌液體時無明顯阻力；
（5）成年小鼠每次最大可灌1.0 mL。

1日齡鼠仔裸體鮮紅，3日齡耳殼露出表皮，4日齡期待疤痕脫落，5日齡能翻身，8日齡能爬行，10日齡能聽見聲音，9-11日齡全身被白毛且長出門齒，13-15日齡眼皮張開、能跳躍和抓取東西，18日齡后能自行采食和獨立生活。

（1）注射前可用50 ℃左右熱水浸泡小鼠尾部約1 min左右，見尾靜脈明顯充盈起來即可；
（2）拉平拉緊尾部，使得尾部靜脈處于一個平面上；若無法完成，可用手托起或踮起部分尾部使尾靜脈伸展；
（3）注射前用酒精涂抹尾部，使尾靜脈完全暴露；
（4）注射時要斜面向上，選擇平行與尾靜脈的方向刺入，不要有任何角度，刺入約0.5-1 cm后退針但不要完全退出，斜面退出約一半時如果針在血管里會有血冒出，然后再次進針，進針距離要短于第一次進針距離，否則會刺穿血管。然后推注液體，此時應(yīng)該不會感到有很大阻力，可以看到尾靜脈血管變白，但是周圍組織沒有腫，此時順利完成尾靜脈注射；
（5）不推薦根據(jù)推注壓力感覺是否進入血管，因為這樣會浪費一部分細胞，導(dǎo)致計數(shù)不準。

跨多級的VSV注射滴度為10⁹ IFU/mL，不 跨突觸VSV-ΔG 注射滴度為10⁷ IFU/mL。在大小鼠標記試驗中，病毒注射體積根據(jù)實驗方法（需求、滴度、表達量）的不同也存在差異，推薦的注射體積中樞注射一般為50-300 nL，外周注射一般為1-3 μL。

10⁸ IFU/mL。推薦的注射體積為混合后的總體積100-300 nL，注射速度為20-50 nL/min。若目標核團較小或Cre在該區(qū)域的外周圍也有較多表達，為控制起始感染區(qū)域的特異性，可適當降低注射AAV病毒的體積及速度；反之，如需標記大范圍或Cre只在局部區(qū)域高特異性表達，可增加AAV注射的體積與速度。

為保證RV-EnvA-ΔG-DsRed注射時已有高豐度表達的TVA介導(dǎo)其感染神經(jīng)元及G蛋白補償其跨突觸能力，AAV注射后需表達兩周或三周， 然后在同一區(qū)域注射RV-EnvA-ΔGdsRed；RV注射后一般以10天為標準時間犧牲動物，而此時間也可控制在7-12天（所有實驗樣本都需保證采用一致的時間窗口）。

大腦中樞注射VSV后，對動物具有較強毒性， 感染VSV后存活時間一般為3-4天（中樞注射），動物體質(zhì)不同，存活時間也有差異。外周注射存活時間延長2~4天。因此，病毒注射后，可根據(jù)環(huán)路連接級數(shù)多少在不同時間點取樣。在中樞，跨突觸數(shù)目經(jīng)驗值為：跨1~2級，24~36小時；跨2~3級， 30~ 48小時； 需經(jīng)常查看動物狀態(tài)，以免動物提前死亡，影響正常取樣。