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腺相關(guān)病毒AAV

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慢病毒載體(lentivirus vector，LV)屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科(Retrovidae)，為 RNA病毒。區(qū)別一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，它對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力。慢病毒載體的研究發(fā)展得很快，研究的也非常深入。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而達(dá)到持久性表達(dá)。
感染能力方面可有效地感染神經(jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞，從而達(dá)到良好的的基因治療效果，在美國已經(jīng)開展了臨床研究，效果非常理想，因此具有廣闊的應(yīng)用前景。

優(yōu)勢(shì)

慢病毒與其他病毒工具比較，具有以下優(yōu)勢(shì)：
1）表達(dá)時(shí)間長：慢病毒通過將外源基因整合到宿主細(xì)胞基因組上，可實(shí)現(xiàn)目的基因長時(shí)間穩(wěn)定的表達(dá)，不隨著細(xì)胞分裂傳代而丟失，是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的首選；
2）安全性高：未發(fā)現(xiàn)致病性，已被用于CAR-T 治療作用于人體；
3）免疫原性低：直接注射活體組織不易造成免疫反應(yīng)，適用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。

可選擇的病毒載體

詳情見：基因過表達(dá)、基因干擾

應(yīng)用

1）將目的基因?/RNAi?基因轉(zhuǎn)入難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，比如神經(jīng)元細(xì)胞、干細(xì)胞或其它原代細(xì)胞；
2）將目的基因?/RNAi?基因轉(zhuǎn)入動(dòng)物組織，以期獲得長期表達(dá)；
3）構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白?/RNAi?的細(xì)胞系，再用exvivo的方法導(dǎo)入動(dòng)物體內(nèi)；
4）基因治療；
5）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物；?
6）基因敲除；
7）藥物研究：構(gòu)建表達(dá)受體蛋白的細(xì)胞系，研究藥物的作用；?
8）快速建立生產(chǎn)目的蛋白的細(xì)胞系，非常有前途的真核細(xì)胞表達(dá)方法。

案例展示

案例一：慢病毒度感染不同類型的細(xì)胞系

圖1. 慢病毒可以高效的感染各類腫瘤細(xì)胞、干細(xì)胞、原代細(xì)胞、和不分裂的細(xì)胞

案例二：LV介導(dǎo)基因沉默體外研究神經(jīng)元棘突和突觸功能
神經(jīng)元細(xì)胞感染表達(dá)b-Catenin小發(fā)夾RNA (shRNA)的慢病毒，使大部分神經(jīng)元敲除b-Catenin。b-Catenin敲低后，神經(jīng)元細(xì)胞棘突穩(wěn)定性受到破壞。