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       狂犬病毒（Rabies Virus，RV）屬于彈狀病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病毒屬（Lyssavirus）。其基因組是長(zhǎng)約12 kb的單股負(fù)鏈RNA，由3′端至5′端依次排列著N、P、M、G和L共5個(gè)狂犬病毒的結(jié)構(gòu)基因，分別編碼核蛋白、磷蛋白、基質(zhì)蛋白、糖蛋白和轉(zhuǎn)錄酶大蛋白（如圖1）。
       RV在宿主體內(nèi)，病毒糖蛋白G介導(dǎo)病毒粒子與細(xì)胞表面受體結(jié)合，通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。隨后通過pH介導(dǎo)膜融合，促使RV基因組釋放到細(xì)胞質(zhì)中。感染病毒粒子內(nèi)包裝的L、N、P共同構(gòu)成的聚合酶復(fù)合物以基因組負(fù)鏈RNA為模板啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄表達(dá)，復(fù)制，組裝，出芽產(chǎn)生子代病毒。（如圖2）
       野生型RV是人畜共患的狂犬病的致病因子，在神經(jīng)系統(tǒng)中具有傳播屬性，對(duì)人和動(dòng)物均具有較高致病性。隨著反向遺傳學(xué)手段的成熟，經(jīng)過改造的RV，可用于神經(jīng)回路研究。RV感染中樞系統(tǒng)后，主要標(biāo)記神經(jīng)元，幾乎不標(biāo)記膠質(zhì)細(xì)胞；被感染的神經(jīng)元在一定時(shí)間內(nèi)（7-12天）幾乎不發(fā)生明顯病變及裂解。目前RV系統(tǒng)可分為逆向標(biāo)記系統(tǒng)和逆向跨單突觸系統(tǒng)。

第一代逆向標(biāo)記系統(tǒng)（RV-ΔG）

       RV的囊膜糖蛋白（glycoprotein，G）是其逆行跨突觸所必需的蛋白，G蛋白缺失的RV（RV-ΔG）會(huì)喪失跨突觸能力，但其復(fù)制及轉(zhuǎn)錄不受影響（可持續(xù)高豐度表達(dá)外源基因），因此，RV-ΔG攜帶報(bào)告基因后，可逆向高亮度標(biāo)記神經(jīng)元精細(xì)形態(tài)。

第二代逆向標(biāo)記系統(tǒng)  [RV-N2c(G)-ΔG]

       CVS-N2c病毒株具有更低的神經(jīng)毒性以及更強(qiáng)的跨突觸突觸傳遞能力，其G蛋白缺失的RV [RV-N2c(G)-ΔG] 能在更低的滴度達(dá)到與第一代RV-ΔG相同甚至更好的逆向標(biāo)記效果，且神經(jīng)毒性更低。

逆向跨單突觸系統(tǒng)（RV-EnvA-ΔG）

       利用重組的禽類肉瘤病毒（Aviansarcoma-leukosisvirus，ASLV）的外膜蛋白（EnvA）融合蛋白包裝RV形成的病毒粒子，可特異性識(shí)別EnvA的受體TVA（TVA只存在于禽類細(xì)胞中，在哺乳動(dòng)物神經(jīng)元中無(wú)表達(dá)）介導(dǎo)病毒特異性地感染細(xì)胞。利用Cre轉(zhuǎn)基因鼠結(jié)合Cre-LoxP控制表達(dá)TVA及G蛋白的AAV輔助病毒，可實(shí)現(xiàn)只在特定區(qū)域特異類型神經(jīng)元中表達(dá)TVA及G蛋白，從而利用RV-EnvA-ΔG實(shí)現(xiàn)對(duì)特異類型神經(jīng)元的逆向跨單級(jí)突觸標(biāo)記（如圖3）。在此基礎(chǔ)上，使RV-EnvA-ΔG帶上ChR2及GCaMP等基因，可實(shí)現(xiàn)對(duì)特異類型神經(jīng)元的直接輸出網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行功能操縱及活動(dòng)監(jiān)測(cè)。

應(yīng)用

1）特定區(qū)域特異類型神經(jīng)元的全腦單級(jí)輸入網(wǎng)絡(luò)標(biāo)記；（見案例展示二）
2）兩個(gè)區(qū)域特異類型神經(jīng)元跨單級(jí)輸入網(wǎng)絡(luò)標(biāo)記；（見案例展示一）
3）三級(jí)連接網(wǎng)絡(luò)的跨單突觸標(biāo)記。

產(chǎn)品列表

RV-CVS株產(chǎn)品列表：

 

SAD-B19株產(chǎn)品列表：

 

案例展示

實(shí)例一：逆向標(biāo)記海馬錐體神經(jīng)元中同時(shí)作用于mPFC和ACB中的GABA能神經(jīng)元（圖4，PMID: 31285615）

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：抑制性神經(jīng)元(SST, PV, VIP)的Cre小鼠
使用的病毒：RV-EnvA-GFP，AAV-DIO-TVA-hBFP和AAV-DIO-RG
實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果：在抑制性神經(jīng)元(SST, PV, VIP)的Cre小鼠mPFC腦區(qū)注射RV-EnvA-GFP以及Cre依賴的輔助病毒AAV-DIO-TVA-hBFP和AAV-DIO-RG實(shí)現(xiàn)逆向跨單級(jí)突觸，同時(shí)在ACB腦區(qū)注射從軸突末梢吸收的RV-DG-DsRed，病毒逆向標(biāo)記海馬體投射到ACB區(qū)的神經(jīng)元，最終找到海馬體中同時(shí)調(diào)控mPFC和ACB區(qū)的GABA能神經(jīng)元。（如圖4）

實(shí)例二VTA多巴胺能神經(jīng)元分離的支配NAC和mOT（圖5，PMID: 29251597）

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：C57BL/6 mice
使用的病毒：RV-DG-DsRed和RV-DG-GFP，滴度10的8次方TU
實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果：分別注入100 nl RV-DG-DsRed和RV-DG-GFP在NAC和mOT中，1周后灌流取材，可在VTA追蹤到神經(jīng)元。