細(xì)胞實(shí)驗(yàn)常見問題（二）
A.答案
-80℃分裝儲存，凍融一次損失10 % ，應(yīng)避免反復(fù)凍融。保存6-12個(gè)月以上的樣品，進(jìn)行試驗(yàn)前，重新測一次滴度。病毒產(chǎn)品解凍后最好保持在冰格中，并盡快使用。如果解凍后的病毒一時(shí)用不完，滴度足夠高時(shí)，4 ℃可保存1-2周。但應(yīng)盡快使用，一般4 ℃放置一周，滴度會有4-5倍的下降。
A.答案
可適當(dāng)稀釋，在實(shí)驗(yàn)過程中稀釋病毒的等滲溶液沒有其他特殊要求，常規(guī)的動物實(shí)驗(yàn)用PBS、生理鹽水等即可。稀釋后的樣品盡量一次性用完。
A.答案
AAV包裝能力可以達(dá)到4.9 kb。兩端ITR200-300 bp，外源基因插在兩個(gè)ITR之間，隨著插入外源基因的變大， AAV的包裝能力將降低。
A.答案
野生型AAV不能獨(dú)立存在，需在輔助病毒如腺病毒、單純癟彥病毒存在的條件下，才能在感染的宿主細(xì)胞中復(fù)制合成裝配蛋白，產(chǎn)生新的病毒顆粒。重組AAV載體(rAAV）的制備llPAAV的rep.及cap基因由外源基因表達(dá)框替代，而只保留了兩端的ITR序列，在生產(chǎn)rAAV時(shí)，需要提供Rep和Cap蛋白的反式功能以及其他輔助病毒的輔助功能，帶有外源基因的重組AAY基因組才會被營救、復(fù)制并包裝成rAAV病毒。
A.答案
慢病毒對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均有感染能力，整合至細(xì)胞基因組并長期穩(wěn)定表達(dá)，體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)皆可用。
A.答案
病毒液超過1 mL時(shí)，-80 ℃取出后可37 ℃水浴解凍；100-1000微升之間可室溫解凍；小于100微升可在4 ℃冰上解凍，實(shí)驗(yàn)前5 min冰上取出，恢復(fù)至室溫。使用PBS緩沖液或培養(yǎng)目的細(xì)胞無血清培養(yǎng)基稀釋病毒，混勻分裝后使用。稀釋后的樣品盡量一次用完。
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